Бактериологичен метод на изследване: етапи, цели, характеристики

Изследването на бактериите е от голямо практическо значение за човека. Към днешна дата са открити голям брой прокариоти, които се различават един от друг по отношение на патогенността, разпределението, формата, размера, броя на фланела и други параметри. За подробно изследване на този щам се използва бактериологичен метод на изследване.

Какви са методите за анализ на бактериалните клетки?

За да се определи дали бактериите са патогенни, културата се тества по различни начини. Сред тях:

1. Бактериоскопичен метод.

2. Бактериологичен метод.

3. Биологичен метод.

Бактериоскопските и бактериологичните методи за изследване се основават директно на работа с прокариотни клетки, когато се изисква биологичен анализ за изследване на ефекта на такива клетки върху живия организъм на експерименталните животни. Съгласно степента на проявяване на някои признаци на болестта ученият може да заключи, че в пробата има или не патогенни бактерии, а също и естествено ги умножи в тялото на животното, за да получи тяхната култура и да ги използва в други произведения.

Бактериологичният метод на изследване се различава от бактериоскопския метод. В първата се използва специално подготвена култура на живите прокариоти за анализ, когато втората работи с мъртви или живи клетки върху плъзгач.

Етапи на бактериологичния метод на изследване. микробиология

Принципът на изследване на свойствата на бактериалната култура може да бъде полезен както за микробиолозите, които са си поставили за цел изследването на прокариотни клетки, така и за лабораторните помощници, чиято задача е да установят патогенността или непатогенността на бактериите и след това да диагностицират пациента.

Методът на изучаване на бактериите е разделен на три етапа:

1. Изолиране на бактериите от оригиналната проба.

2. Сеитба на бактерии и култивиране на чиста култура, изследване на нейните свойства.

3. Подробно изследване на бактериални клетки.

Първият етап

Пробата или намазката се взема от свободната повърхност на средата или от пациента. По този начин получаваме "коктейл" от различни видове бактерии, които трябва да бъдат засети на хранителна среда. Понякога става възможно незабавно да се идентифицират необходимите бактерии, като се знае къде се разпространяват в тялото.

След два до три дни, необходимите колонии се подбират и се поставят върху твърдата среда на петриеви блюда с помощта на стерилна бримка. Много лаборатории работят с епруветки, в които може да има твърда или течна хранителна среда. Също така е и бактериологичният метод за изследване в микробиологията.

Вторият етап

След получаване на отделни колонии от бактерии се извършва директен макро и микроанализ. Измерват се всички параметри на колониите, се определя цветът и формата на всеки от тях. Често се извършва чрез преброяване на колонии върху петриева плата и след това в изходния материал. Това е важно при анализа на патогенните бактерии, на брой от които зависи степента на заболяването.

Бактериологичният метод на изследване, вторият етап от който е да се изследват отделни колонии от микроорганизми, може да бъде свързан с биологичен метод за анализ на бактерии. Друга цел на работата на този етап е да се увеличи количеството на изходния материал. Тя може да бъде направена на хранителна среда и е възможно да се проведе експеримент in vivo в живите експериментални организми. Патогенните бактерии ще се размножават и в резултат кръвта ще съдържа милиони прокариотни клетки. От кръвта е лесно да се подготви необходимия работен материал на бактериите.

Третият етап

Най-важната част от изследването е определянето на морфологичните, биохимичните, токсигенните и антигенните свойства на бактериалната култура. Работата се извършва с предварително "пречистени" култури върху хранителна среда, както и с препарати (често оцветени) под микроскоп.

Да се идентифицира принадлежността на патогенни или условно патогенни бактерии към определена систематична група, както и да се определи тяхната устойчивост към лекарствата, позволява бактериологичният метод на изследване. Етап 3 - антибиотици, т.е. анализ на поведението на бактериалните клетки в условията на лекарствени продукти в околната среда.

Изследването на устойчивостта на културата към антибиотик е от голямо практическо значение, когато е необходимо да се предпише за определен пациент необходимите и най-важните ефективни лекарства. Тук и бактериологичният метод на изследване може да помогне.

Какво представлява хранителната среда?

За развитието и репродукцията бактериите трябва да са в предварително приготвени хранителни среди. По последователност те могат да бъдат течни или твърди и по произход - растителни или животински.

Основни изисквания за хранителните среди:

1. Стерилност.

2. Максимална прозрачност.

3. Оптимални параметри на киселинността, осмотичното налягане, водната активност и други биологични количества.

Приготвяне на изолирани колонии

1. Методът на Drigalsky. Състои се в прилагането на смазка с различни видове микроорганизми към бактериалния цикъл. Този цикъл се извършва на първата петриева чиния с хранителна среда. Освен това, без да се променя цикъла, методът на остатъчния материал се извършва върху втората и третата петриева чиния. Така че, на последните проби от колонията, бактериите няма да бъдат засадени твърде плътно, което ще улесни откриването на бактериите, необходими за работата.

2. Метода Кох. Използва тръби с разтопена хранителна среда. Там се поставя цикъл или пипета с намазка от бактерии, след което съдържанието на епруветката се излива върху специална плоча. Агарът (или желатинът) замръзва след известно време, а в дебелината му е лесно да се намерят необходимите колонии от клетки. Важно е преди да започнете да разреждате сместа от бактерии в епруветките, така че концентрацията на микроорганизмите да не е много голяма.

Бактериологичният метод на изследване, етапите на които се основават на изолирането на желаната бактериална култура, не се извършва без тези два метода за намиране на изолирани колонии.

antibiotikogrammy

Визуално реакцията на бактериите към лекарствата може да се види по два практически начина:

1. Методът на хартиените дискове.

2. Размножаване на бактерии и антибиотици в течна среда.

Методът на хартиените дискове изисква наличието на култура от микроорганизми, които са отглеждани на твърда хранителна среда. На тази среда се поставят няколко кръгли хартии, импрегнирани с антибиотици. Ако лекарството успешно се справи с неутрализирането на бактериални клетки, след това лечение остава място без колонии. Ако реакцията на антибиотика е отрицателна, бактериите ще оцелеят.

В случай на използване на течна хранителна среда, първо се приготвят няколко епруветки с култура от бактерии с различна степен на разреждане. Към тези епруветки се добавят антибиотици и през деня наблюдават процеса на взаимодействие на веществото и микроорганизмите. В крайна сметка се получава качествена антибиотикограма, от която може да се прецени ефективността на лекарството за дадена култура.

Основните задачи на анализа

Тук са изброени целите и етапите на бактериологичния метод на изследване.

1. Получете изходния материал, който ще се използва за изолиране на бактериални колонии. Това може да бъде размазване от повърхността на всеки предмет, лигавица или кухина на човешкото тяло, кръвен тест.

2. Култивиране на култура върху твърда хранителна среда. След 24-48 часа в петриево блюдо можете да намерите колонии от бактерии от различни видове. Избираме необходимите морфологични и / или биохимични критерии и извършваме по-нататъшна работа с него.

3. Възпроизвеждане на получената култура. Бактериологичният метод на изследване може да се основава на механичен или биологичен метод за увеличаване броя на бактериалните култури. В първия случай, работата се извършва с твърда или течна хранителна среда, върху която бактериите се размножават в термостат и образуват нови колонии. Биологичният метод изисква естествени условия за увеличаване на броя на бактериите, така че изпитваното животно е заразено с микроорганизми тук. Няколко дни по-късно много прокариоти могат да бъдат намерени в кръвна проба или смазка.

4. Работете с пречистената култура. За да се определи системното разположение на бактериите, както и тяхната принадлежност към патогени, е необходимо да се извърши задълбочен анализ на клетките според морфологичните и биохимичните характеристики. Когато изследваме патогенни групи микроорганизми, е важно да знаем колко е ефективно действието на антибиотиците.

Това е обща характеристика на бактериологичния метод на изследване.

Характеристики на анализа

Основното правило за провеждане на бактериологични изследвания е максималната стерилност. Ако се работи с епруветки, културите и бактериите трябва да се реплицират само върху нагрят спирт.

Всички етапи на бактериологичния метод на изследване изискват използването на специална контур или пипета Pasteur. Двата инструмента трябва да бъдат предварително обработени в пламъка на спиртната лампа. Що се отнася до пипетата Pasteur, след това преди термична стерилизация е необходимо да се счупи върха на пипетата с пинцети.

Техниката на засяване на бактериите също има свои собствени характеристики. Първо, когато се засяват в твърда среда, извършете бактериална линия над повърхността на агара. Веригата, разбира се, вече трябва да има проба от микроорганизми на повърхността. Също се практикува сеене в средата на култивиране, в който случай цикълът или пипетата трябва да достигнат до дъното на петриевото блюдо.

При работа с течна среда се използват тръби. Важно е да се внимава течностите да не докосват ръбовете на лабораторните чинии или корк, а използваните инструменти (пипета, бримка) да не докосват чужди предмети и повърхности.

Значението на биологичния метод на изследване

Анализът на проба от бактерии има практическо приложение. На първо място бактериологичният метод на изследване може да се използва в медицината. Например, е необходимо да се проучи микрофлората на пациента, за да се установи правилната диагноза и да се направи правилен курс на лечение. Тук помага антибиотикограмата, която ще покаже активността на лекарствата срещу причинителя на заболяванията.

Анализът на бактериите се използва в лабораторията за определяне на такива опасни заболявания като туберкулоза, повтарящ се тиф или гонорея. Използва се и за изследване на бактериалния състав на сливиците, кухините на органите.

Бактериологичният метод за изследване може да се използва за определяне на замърсяването на околната среда. Съгласно количествения и качествен състав на намазката от повърхността на даден обект, степента на популация на дадена среда се определя от микроорганизмите.